guozhiwei 发表于 2022-11-11 09:55:13

要闻:胶回收试剂盒里各溶剂的作用?


  1试剂盒
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  简介:

  试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。土壤检测是当下比较受关注的行业产品,我们网站内汇集很多最近最新的资讯,欢迎点击进入了解更多消息资讯!

  2胶回收试剂盒的操作步骤(omega)

  1. 配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。

  我们强烈的推荐使用新鲜的TAE/TBE电泳缓冲液。不要重复使用电泳缓冲液,旧的电泳缓冲液PH会增加而降低DNA的回收产量;

  2. 电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。

  注意:DNA在紫外灯下的曝光的时间不要超过30秒,同时在紫外灯下操作的时候一定要戴保护眼镜。

  3. 称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积。一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;

  重要提醒:在凝胶完全溶解之后,注意凝胶-Binding Buffer混合物的pH值。如果其pH值大于8的话,DNA的产量将大大减少。观察混合物的颜色,如果是橙色或红色,则要加入5μl 浓度为5 M,pH为5.2的醋酸钠,以调低其pH值。经过这一调节,该混合物的颜色将恢复为正常的浅黄色。一般情况下,使用新鲜的电泳缓冲液,凝胶-Binding buffer混合物的PH值的不会升高;

  4. 转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。

  一个HiBind DNA柱子最多可容纳700μl的溶液,如果DNA-琼脂糖混合物的体积大于700μl,可先转移700μl溶液至柱子,离心完后,将余下的溶液继续加上柱子上。但是每一个HiBindTM柱子最多可以结合25~30μg DNA。如果预期产量较大,则把样品分别加到合适数目的柱中。

  5. 将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心 1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步。

  6. 将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。

  7. 将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;

  8. 弃去液体,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。

  这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。

  9. 把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度。

  如果再洗脱一次的话可以把残余的DNA洗脱出来,不过那样的浓度就会较低。

  DNA的产量及质量:

  把纯化产物的样品稀释一定的倍数后,分别在260nm和280nm下测其光吸收值,回收得到的DNA的浓度可按以下公式来计算: DNA浓度=光吸收260×50×稀释倍数μg/ml

  长度大于500bp的片段通常能纯化得到80%的产量。 而50bp~500bp的带则可达到55%~80%的回收率。(光吸收260/光吸收280)的比率是核酸纯度的一个标记。如果此值1.8,则意味着核酸的纯度>90%。另一方面,如果纯化产物的产量较低时,可以用琼脂糖EB电泳估算产物的浓度。

  胶跑完后蛋白就存在与条带中。用锋利的刀切割条带,放入离心管,再用胶回收试剂盒除去胶,获得蛋白。

前途无量 发表于 2022-12-29 20:31:43

有竞争才有进步嘛

椰风 发表于 2023-1-8 13:31:55

我抢、我抢、我抢沙发~

厉烨 发表于 2023-1-16 07:02:02

好好 学习了 确实不错

好人你我他 发表于 2023-1-22 22:50:29

昌平的网上家园 哈哈 平台不错啊

zhangoli 发表于 2023-1-28 04:15:38

过来看看的

添妻欲抱 发表于 2023-1-31 14:01:36

学习了,谢谢分享、、、
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