开发利用超高效合相色谱(UPC2)分析降胆固醇药物的多产物 ...

liukai · 发表于 2023-5-8 20:07:48

　　本研究介绍了使用ACQUITY超高效合相色谱(UPC2)系统基于实验设计方法进行方法开发的步骤。研究的化合物属于他汀类，用于降低高胆固醇血清水平。专门添加了依折麦布，因为它在几种药物制剂中与他汀类药物联合使用。首先，利用不同的改性剂和样品稀释剂对一组五根色谱柱进行了评估。ACQUITY UPC2色谱柱设计的Torus 1-氨基蒽(1-AA)在分离所有分析物方面表现出优异性能。随后，采用中心复合设计(CCD)评估压力、温度和改性剂用量作为微调参数对分离的影响。在最终色谱条件(采用Torus 1-AA色谱柱，以乙醇-水(95:5)作为改性剂，torus乙腈-乙醇(3:2)作为稀释剂，流速为1.80 mL·min-1，柱温箱温度为42 °C，反压调节器压力为2175 psi，梯度运行条件为改性剂在4 min内从5%增加到15.5%)下，获得了出色的分离结果，关键分析物对的分离度不低于2.0。根据巴西监管机构(ANVISA)的规定验证了该方法，所得r > 0.99;准确度范围为95%~105%，且精密度不大于4.4%(日内和日间精密度均如此)，根据分析物的浓度，判定该方法的性能可接受。

　　优势

　　一种快速分析降胆固醇药物的ACQUITY UPC2方法

　　使用少量乙醇(一种环保溶剂)分析酸性降胆固醇药物，无需在流动相中使用添加剂。

　　以二氧化碳作为主要流动相，减少有机溶剂消耗量

　　简介

　　世界卫生组织的一个小组在2016年指出，缺血性心脏病是全球范围内致死的主要疾病，其次是中风(主要发生在高收入国家)1。这些疾病与血清中胆固醇水平升高有关。已知他汀类药物能够降低胆固醇水平，因为它们会抑制羟甲基戊二酰辅酶A (HMG-CoA)还原酶在肝细胞中合成胆固醇的作用2。因此，他汀类药物广泛用于治疗高胆固醇血症。某些疗法不能通过抑制HMG-CoA的作用来适当地降低胆固醇水平，因此将他汀类药物与依折麦布(一种减少小肠中胆固醇摄取的药物)成功联用3。

　　通常，针对各种他汀类药物或其与依折麦布的联用开发方法4-7。对于这些药物，最常用的分析方法是反相液相色谱(RP-LC)，会消耗大量有机溶剂(乙腈、甲醇)并使用酸性添加剂。本研究介绍了一种利用超临界流体色谱(SFC)的快速多产物分析方法，该方法使用亚2 μm颗粒填充柱8，溶剂消耗量低且无需使用添加剂9。所谓“多产物方法”是指开发一种可用于多种药物(无论这些药物是否存在于同一制剂中)的单一方法。

　　SFC使用超临界流体(通常是二氧化碳(CO2))作为流动相。超临界CO2作为流动相的优势在于粘度低、溶剂化能力强、介于气相与液相之间，而且据称更环保10。使用自动反压调节器(ABPR)改善加压CO2的输送并实现稳定的压力控制以稳定超临界流体，是超临界流体色谱作为一种有竞争力的分析技术复兴的里程碑。在CO2中添加有机溶剂(改性剂)可以改变其固有的非极性特征，从而洗脱更多极性化合物11。这一事实与专为SFC设计的色谱柱以及减小的柱外体积和亚2 μm颗粒的推出相关，提供了更快速、更灵敏的分析，且分离效率与超高效液相色谱一样高或更高8。

　　在现代分析方法开发中，强烈建议利用DOE(实验设计)工具12，将色谱响应作为实验变量的函数建模，在“分析方法质量源于设计”的框架内尤其如此13。在本研究中，首先利用多层分类设计对固定相、流动相改性剂和样品稀释剂等参数进行评估，结果与分析物的化学结构相关(第I部分)。这些是影响选择性、峰形和SFC效率的主要变量14。然后使用中心复合设计(CCD)研究影响洗脱强度15的温度、压力和改性剂百分比等参数，优化该方法，目的在于通过多产物方法分离所有化合物(第II部分)。